Trugarez deoc'h da vezañ deuet da weladenniñ Nature.com. Ar stumm merdeer a implijit en deus ur skoazell bevennet evit CSS. Evit kaout ar gwellañ doare, e kinnigomp deoc'h implijout ur merdeer hizivaet (pe diweredekaat ar mod keverlec'hiañ en Internet Explorer). E-keit-se, evit ma vo kendalc'het gant ar skoazell, e vo diskouezet al lec'hienn hep stiloù ha JavaScript.
Nanopartikloù insulin (NP) gant ur c'hementad kargañ uhel o deus kavet implijoù disheñvel e stummoù doareoù disheñvel. Ar pal-mañ a glask priziañ efed an argerzhioù liofilizadur ha sec'hañ dre strinkañ war framm an nanopartikelloù kitozan karget gant insulin, gant pe hep mannitol evel krioprotektor. Priziet hon eus ivez kalite an nanopartikulennoù-se dre o addisoc'hañ. dizourañ, ment ar rannigoù eus an nanorannigoù liammet kitozan/tripolifosfat sodiom/insulin a oa bet gwellaet da vezañ 318 nm, ar PDI a oa 0,18, an efedusted enkapsulañ a oa 99,4%, hag ar c'hargañ a oa 25,01%. Goude an adkempenn, an holl nanorannigoù a oa bet produet dieub dre un doare dieubiñ, nemet ar re hep implij mannitol, a zalc'has o framm rannigoù sferek. Keñveriet gant nanorannigoù enno mannitol dizouret gant an eil strinkenn pe egile, an nanorannigoù sec'het hep manitol a ziskouezas ivez ar ment rannigoù keitat bihanañ (376 nm) hag an endalc'had kargañ uhelañ (25,02%) gant feur enkapsuladur heñvel (DI977%) ha PDI. (0,20) dre sec'hañ pe sec'hañ dre skorn. An nanopartikelloù sec'het dre sec'hañ hep mannitol a zegasas ivez an dieubidigezh insulin buanañ hag an efedusted uhelañ eus an adkempenn kelligel. Diskouez a ra al labour-mañ e c'hall ar sec'hañ dre strinkañ dizourañ nanopartikelloù insulin hep ezhomm eus krioprotektantoù e-keñver an doareoù hengounel da sec'hañ dre skorn, ar pezh a grou ur garg brasoc'h barregezh, ezhommoù ouzhpennañ izelañ ha koustoù obererezh ur gounid bras.
Abaoe e zizoloadenn e 19221,2,3, an insulin hag e aozadurioù farmaseutel o deus saveteet buhez ar c'hlañvidi gant an diabetes 1 (T1DM) hag an diabetes 2 (T1DM). Koulskoude, abalamour d'e berzhioù evel ur protein a bouez molekulel uhel, e vez aes da zastum an insulin, da dorriñ gant enzimoù proteolitek, ha da vezañ diagnozet gant an efedoù diagnostik da gentañ-penn. gant an diabetes 1 o deus ezhomm eus ensinkladennoù insulin e-pad ar peurrest eus o buhez. Kalz klañvidi diagnozet gant an diabetes 2 da gentañ o deus ezhomm ivez eus ensinkladennoù insulin hir. An ensinkladennoù insulin pemdeziek a zo ur font grevus a boan ha dic'hoant pemdeziek evit an dud-se, gant efedoù negativel war ar yec'hed ment. Dre-se, doareoù all da ginnig insulin a zegas nebeutoc'h a zic'hoant, evel bezañ meret dre insulin dre vras studiet5 rak gallout a reont adtapout kalite buhez war-dro 5 miliard a dud gant an diabetes dre ar bed a-bezh.
An teknologiezh nanopartikulennoù he deus roet un araokadenn bouezus evit klask kemer insulin dre gomz4,6,7. Unan hag a enkapsul hag a warez an insulin diouzh an diskar evit bezañ degaset da lec'hioù resis er c'horf. Koulskoude, implij ar stummoù nanopartikulennoù en deus meur a vevenn, dreist-holl abalamour da gudennoù stabilded ar c'hefluskerioù. Lod a c'hell c'hoarvezout e-pad ar stokañ, ar pezh a zigresk ar biodisponibilite nanopartikloù karget gant insulin8.Ouzhpenn-se e ranker kemer e kont ivez stabilded kimiek matris polimer an nanopartikelloù hag an insulin evit gwarantiñ stabilded an nanopartikulennoù insulin (NP). Hiziv an deiz eo an teknologiezh liofilizadur ar standard aour evit krouiñ NPoù stabil en ur virout ouzh kemmoù dic'hoantaet e-pad ar stokañ9.
Koulskoude, ar sec'hañ dre skorn a c'houlenn ouzhpennañ krioprotektantoù evit mirout ouzh framm sferek an NP da vezañ gwallet gant stress mekanik ar c'hristalennoù skorn. Gant-se e vez digresket kalz kargadur nanopartikelloù insulin goude al liofilizadur, rak ar c'hrioprotektant a gemer an darn vrasañ eus ar c'heñver pouez. Dre-se e vez kavet alies an NPoù evit produiñ insulin an NP evit produiñ an NPoù. n'eo ket dereat evit sevel stummoù poultr sec'h, evel tabletennoù dre gomz ha filmoù dre gomz, abalamour d'an ezhomm eus kementadoù bras a nanopartikelloù sec'h evit tizhout ar prenestr terapeutek eus an insulin.
Ar sec'hañ dre strinkañ zo un argerzh greantel anavezet mat ha marc'had-mat evit produiñ poultr sec'h diwar fazioù liñvel er greanterezh farmaseutel10,11. Ar c'hontrol war an argerzh stummañ rannigoù a aotre enkapsuladur dereat meur a elfenn bioaktivel 12, 13 .Ouzhpenn-se eo deuet da vezañ un teknik efedus evit prientiñ ar proteinoù enkapsulet pe enkapsulet merañ. E-pad ar sec'hañ dre strinkañ e vez aezhennet buan-tre an dour, ar pezh a sikour da virout temperadur kreiz ar rannigoù izel11,14, ar pezh a aotre e implij da enkapsulañ elfennoù kizidik ouzh an tommder. A-raok sec'hañ dre strinkañ e ranker homogenekaat mat an danvez goleiñ gant an disoc'h ennañ ar c'hementadoù enkapsulet, evel Un, 1114, o tigeriñ. an homogenizadur a-raok an enkapsulañ e-pad ar sec'hañ dre strinkañ a wella efedusted an enkapsulañ e-pad an dizourañ. Dre ma ne vez ket ezhomm eus krioprotektantoù evit ar sec'hañ dre strinkañ e c'haller implijout ar sec'hañ dre strinkañ evit produiñ NPoù sec'h gant ur c'harg uhel.
Ar studiadenn-mañ a ginnig produiñ NPoù karget gant insulin dre liammañ ar c'hitozan hag an tripolifosfat sodiom dre implijout un doare gel ion. Ar geladur ion zo un doare prientiñ a aotre produiñ nanopartikelloù dre etregweredoù elektrostatek etre daou spesad ionek pe meur a hini dindan degouezhioù resis. Implijet e oa bet an teknikoù sec'hañ dre skorn hag ar sec'hañ dre strinkañ evit dizourañ an doareoù gwellaet nanopartikelloù liammet gant kitozan/tripolifosfat sodiom/insulin. Goude an dizourañ e voe dielfennet o morfologiezh dre SEM. Priziet e voe o galloud da adkempenn dre vuzuliañ o dasparzh ment, o c'harg gorre, o PDI, o efedusted enkapsulañ hag o endalc'had kargañ. Priziet e voe ivez kalite an nanopartikloù diskoulmet produet dre o doareoù dizourañ insulin dre geñveriañ o insulin gwareziñ, emzalc'h dieubiñ, hag efedusted an degemer kelligel.
pH an disoc'h mesket ha feur ar c'hitozan hag an insulin a zo daou faktor pennañ a efed war ment ar rannigoù hag efedusted enkapsulañ (EE) an NPoù diwezhañ, dre ma vez levezonet war-eeun gant argerzh gelaouiñ ionotropek. Diskouezet e oa bet e oa liammet-tre pH an disoc'h mesket gant ment ar rannigoù hag efedusted enkapsulañ (Skeudenn 1A evel ma tiskouez ar pH e kresk ar skeudenn 1a). 4,0 da 6,0, e tigreske ment ar rannigoù keitat (nm) hag e kreske kalz an EE, tra ma kreske ar pH da 6,5 ​​e kroge ar ment rannigoù keitat da greskiñ hag e chome an EE hep cheñch. A-feur ma kresk ar c'heñver etre ar c'hitozan hag an insulin e kresk ivez ar ment rannigoù keitat. Ouzhpenn-se, ne oa bet gwelet kemm ebet e EE pa ne oa bet prientet EE e lec'hioù ebet keñver tolz ar c'hitozan/insulin uheloc'h eget 2,5:1 (p/p) (Skeudenn 1b). Dre-se e oa bet implijet an doareoù prientiñ gwellañ er studiadenn-mañ (pH 6,0, keñver tolz kitozan/insulin 2,5:1) evit prientiñ nanopartikulennoù karget gant insulin evit ur studiadenn all. Dindan an doare prientiñ-se e oa bet gwellaet ment keitat ar rannigoù nanorannigoù insulin 318 nm (Skeudenn 1c), ar PDI a oa 0,18, an efedusted enkorfañ a oa 99,4%, ar c'halloud zeta a oa 9,8 mv, hag ar garg insulin a oa 25,01% (m/m). Diazezet war disoc'hoù ar mikroskopiezh elektronek treuzkas (TEM), an nanopartikloù gwellaet a oa sferek ha ment unvan a-walc'h (Skeudenn 1). 1d).
Gwellaat arventennoù ar nanopartikelloù insulin : (a) efed ar pH war an treuzkiz keitat hag an efedusted enkapsulañ (EE) eus an nanopartikelloù insulin (prientet gant ur c'heñver tolz 5:1 etre ar c'hitozan hag an insulin); (b) kitozan ha levezon ar c'hementad tolz insulin war treuzkiz keitat ha efedusted enkapsulañ (EE) an NPoù insulin (prientet da pH 6); (c) dasparzh ment ar rannigoù eus nanorannigoù insulin gwellaet ; (d) Mikrograf TEM eus NPoù insulin gwellaet.
Anavezet mat eo ez eo ar c'hitozan ur polielektrolit gwan gant ur pKa a 6,5. Karget pozitivel eo e mediaoù trenk rak protonet eo e strollad amino pennañ gant ionoù hidrogen15. Dre-se e vez implijet alies evel douger evit enkapsulañ makromolekuloù karget negativel. Er studiadenn-mañ e oa bet implijet ar c'hitozan evit enkapsulañ ur poent izolektrolek insulin 5.3.Dre ma vez implijet ar c'hitozan evel danvez goleiñ, gant kresk e lod e kresk tevder ar gwiskad diavaez eus an nanopartikelloù en un doare dereat, ar pezh a zegas ur ment rannigoù keitat brasoc'h. Ouzhpenn-se e c'hall liveoù uheloc'h a c'hitozan enkapsulañ muioc'h a insulin. En hor c'has, EE a oa uhelañ pa errue ar c'heñver etre ar c'hitozan hag an insulin da 25, ha ne oa ket cheñchet kalz. en EE pa kendalc'he ar feur da greskiñ.
Ouzhpenn ar feur etre ar c'hitozan hag an insulin, ar pH en deus c'hoariet ur perzh pennañ ivez e prientiñ an NPoù.Gan et al. 17 a studias efed ar pH war ment ar rannigoù nanorannigoù kitozan. Kavet o deus un digresk kendalc'hus e ment ar rannigoù betek ma tizhfe ar pH 6,0, hag ur c'hresk bras e ment ar rannigoù a voe gwelet e pH > 6,0, ar pezh a glot gant hon evezhiadennoù. An anadenn-se a zo abalamour d'ar fed ma kresk ar pH e tap ar volekulenn insulin ur garg negativel, o faotañ dezhañ etregweredoù elektrostatek gant ar c'hemplezh kitozan/tripolifosfat sodiom (TPP), ar pezh a zegas ur ment rannigoù bihan hag un EE uhel. Koulskoude, pa voe kemmet ar pH da 6,5, e voe diprotonet ar strolladoù amino war ar c'hitozan, ar pezh a laka ar c'hitozan da vezañ plegañ. Evel-se, ur pH uhel a laka nebeutoc'h a ionoù TPP da vezañ lakaet dirak an ionoù TPP, ar pezh a laka an insulin da vezañ izeloc'h ment rannigoù keitat diwezhañ ha EE izelañ.
An analizenn eus perzhioù morfologel an NPoù sec'het dre skorn ha sec'het dre spurmant a c'hell reiñ tu da zibab gwelloc'h teknikoù dizourañ ha stummañ poultr. An doare gwellañ a zlefe reiñ stabilded ar medisin, stumm ar rannigoù unvan, kargadur uhel ar medisined ha dizoloadenn vat en disoc'h orin. Er studiadenn-mañ, evit keñveriañ gwelloc'h an div deknik, e oa bet implijet NPoù gant insulin pe hep 1% manol e-pad an dizourañ. implijet e vez evel un elfenn stankañ pe ur c'hrioprotektant e meur a stumm poultr sec'h evit ar sec'hañ dre skorn hag ar sec'hañ dre strinkañ. Evit an nanopartikloù insulin liofilizet hep manitol, evel m'eo diskouezet e skeudenn 2a, e oa bet gwelet ur framm poultr toullet-tre gant gorreadoù bras, direizh ha garv dindan mikroskop elektronek (rannigoù SEM a oa bet gwelet). detektet er poultr goude an dizourañ (Skeudenn 2e). An disoc'hoù-se a ziskouez e oa bet distrujet an darn vrasañ eus an NPoù e-pad ar sec'hañ dre skorn hep krioprotektant ebet. Evit ar nanopartikelloù insulin sec'het dre skorn ha sec'het dre strinkañ enno 1% mannitol e oa bet gwelet nanopartikelloù sferek gant gorreadoù eeun (Skeudenn 2e, Infulin). nanopartikelloù sec'het dre strinkañ hep mannitol a chomas sferek met strinket war an diavaez (Skeudenn 2c). Ar gorreadoù sferek ha strinket a vez komzet muioc'h diwar o fenn er c'homporter skarzhañ hag an testenioù degemer kelligoù amañ dindan.Diwar an neuz gwelus eus an NPoù sec'h, an NPoù sec'het dre strinkenn hep manitol hag an NPoù sec'het dre strinkenn hep manitol ha sec'het gant mannitol hep produiñ a rae poultrennoù NPs fin (Skeudenn 2f,g,h). Seul vrasoc'h eo gorread ar gorread etre gorreadoù ar rannigoù, seul uheloc'h eo an dizoloadenn ha dre-se seul uheloc'h ar feur skarzhañ.
Morfologiezh an NPoù insulin dizouret disheñvel : (a) Skeudenn SEM an NPoù insulin liofilizet hep mannitol ; (b) Skeudenn SEM eus NPoù insulin liofilizet gant manitol ; (c) NPoù insulin sec'het dre strinkañ hep skeudenn SEM mannitol eus ; (d) Skeudenn SEM eus NPoù insulinenn sec'het gant mannitol ; (e) skeudenn eus poultr NPs insulin liofilizet hep mannitol ; (f) skeudenn eus NPoù insulin liofilizet gant mannitol ; ( g) Skeudenn poultr NPs insulin sec'het dre strinkañ hep manitol ; (h) skeudenn eus poultr NPs insulin sec'het gant mannitol.
E-pad ar sec'hañ dre skorn e talvez ar mannitol da c'hrioprotektant, o virout an NPoù en ur stumm amorf hag o virout ouzh an distrujoù gant ar c'hristalloù skorn19. Er c'hontrol, n'eus pazenn skorn ebet e-pad ar sec'hañ dre skorn. Dre-se n'eus ket ezhomm eus manitol en doare-se. E gwirionez, an NPoù sec'het dre skorn hep manol a roe NPoù fin evel a-raok deskrivet. Koulskoude, ar manitol a c'hell c'hoazh ober evel lenner en argerzh sec'hañ dre strinkañ evit reiñ d'an NPoù ur framm sferekoc'h20 (Skeudenn 2d), ar pezh a sikour da gaout un emzalc'h dieubiñ unvan eus an NPoù enkapsulet-se. Ouzhpenn-se eo sklaer e c'haller detektiñ rannigoù bras zo e-barzh an NPoù sec'het dre skorn ha sec'het dre strinkenn a endalc'h insulin (Skeudenn 2d). 2b,d), ar pezh a c'hell bezañ abalamour da zastum manitol e kreiz ar rannigoù asambles gant an insulin enkapsulet. Ret eo merkañ er studiadenn-mañ, evit ma chomfe ar framm sferek en he fezh goude an dizourañ, e vez miret ar c'heñver etre ar mannitol hag ar c'hitozan da 5:1, evit ma c'hallfe ur bern leuniadur brasaat ment ar rannigoù eus an NP sec'h ivez.
Gant ar spektroskopiezh dre dreuzfurmadur Fourier dre adskeudenn hollek gwanaet (FTIR-ATR) e oa bet termenet ar meskaj fizikel a insulinenn frank, kitozan, kitozan, TPP hag insulinenn. An holl NPoù dic'hizet a oa bet termenet dre ar spektroskopiezh FTIR-ATR. Dreist-holl e oa bet gwelet kreñvder bannoù 1641, 1543 ha 141 cm enkapsulet e NPoù sec'het dre skorn gant mannitol hag en NPoù sec'het gant ha hep manitol (Skeudenn 3). Evel m'eo bet embannet a-raok, e oa liammet ar c'hresk-se e nerzh gant liammoù etre ar c'hitozan, an TPP hag an insulin. Enklask an etregwered etre ar c'hitozan hag an insulin a ziskouezas e oa er spektroù FTIR eus ar c'hitozan karget gant insulin, ar bannoù kitosan karget gant insulin, a oa dreist-holl gant insulin kreskiñ a ra ar vandenn karbonil (1641 cm-1) hag amin (1543 cm-1). Liammet eo ar strolladoù tripolifosfat eus TPP ouzh strolladoù amoniom er c'hitozan, o sevel ur vandenn da 1412 cm-1.
Spektroù FTIR-ATR an insulin frank, ar c'hitozan, ar meskajoù fizikel eus ar c'hitozan/TPP/insulin hag an NPoù dizouraet dre doareoù disheñvel.
Ouzhpenn-se, an disoc'hoù-se a glot gant ar re a zo bet diskouezet e SEM, a ziskouez e chome an NPoù enkapsulet en o sav pa oant bet strinket ha liofilizet gant mannitol, met pa ne oa ket manitol, ne oa nemet ar sec'hañ dre strinkañ a brodue rannigoù enkapsulet. ar meskaj fizikel a gitozan, TPP hag insulin. An disoc'h-mañ a ziskouez n'eus ket mui al liammoù etre kitozan, TPP hag insulin en NPoù liofilizet hep mannitol. Distrujet e oa bet framm an NPoù e-pad ar liofilizadur hep krioprotektant, ar pezh a c'haller gwelet en disoc'hoù SEM (Skeudenn 2a war disoc'hoù morfologiezh BaFT ha BaIR dihidratet). NPoù insulin, NPoù liofilizet, sec'het dre strinkañ ha hep mannitol hepken a voe implijet evit an arnodoù adkempenn ha NPoù hep manitol abalamour da zistruj NPoù hep manitol e-pad an dizourañ. divizout.
Implijet e vez an dic'hizadur evit ar stokañ hir hag an adkempenn e formulennoù all. Ar galloud a zo gant an NP sec'h da adkempenn goude ar stokañ a zo pouezus-kenañ evit o implij e formulennoù disheñvel evel ar tabletennoù hag ar filmoù. Merzet hon eus ne oa kresket ment rannigoù keitat an NPoù insulin sec'het dre strinkañ hep mannitol un tamm hepken goude adkempenn, En tu all ment ar rannigoù. kresket kalz eo bet nanopartikelloù insulin sec'het dre strinkañ ha sec'het dre skorn gant mannitol (Taolenn 1). N'eo ket bet kemmet kalz PDI hag EE (p > 0,05) goude adkempenn an holl NPoù er studiadenn-mañ (Taolenn 1). An disoc'h-mañ a ziskouez e oa chomet en o sav an darn vrasañ eus ar rannigoù goude bezañ bet addisoc'het. Koulskoude, ouzhpenn-se e oa bet digresket kalz karg an insulin gant manitol nanopartikelloù manitol liofilizet ha sec'het dre strinkañ (Taolenn 1). Er c'hontrol, ar c'hementad insulin eus an NPoù sec'het dre strinkañ hep manitol a chomas heñvel ouzh hini a-raok (Taolenn 1).
Anavezet mat eo eo pouezus-kenañ kargañ an nanopartikloù pa vez implijet evit degas medisined. Evit an NPoù gant kargadurioù izel e vez ezhomm eus kementadoù bras-tre a dafar evit tizhout ar barr terapeutek. Koulskoude, ar viskozitez uhel eus ar c'hementadoù NP ken uhel a gas d'an diaesterioù ha d'an diaesterioù evit ar pourvezadur dre gomz hag ar formulennoù ensinklañ, hervez an 2 2, ouzhpenn-se e c'hall an NPoù NP. implijet ivez evit sevel tabletennoù ha biofilmoù gludek23, 24, ar pezh a c'houlenn implij kementadoù bras a NPoù e liveoù kargañ izel, ar pezh a zegas tabletennoù bras ha biofilmoù tev ha n'int ket dereat evit an implijoù dre gomz. Dre-se eo ret-holl kaout NPoù dihidratet gant ur garg uhel a insulin. Hor disoc'hoù a ziskouez e vez karget uhel an NPoù hep insulin sec'het hep insulin a c'hell kinnig kalz a vadoù dedennus evit an doareoù degas all-se.
An holl NPoù dizouraet a voe miret er yenerez e-pad tri miz. Disoc'hoù SEM a ziskouezas ne oa ket cheñchet kalz morfologiezh an holl NPoù dizouraet e-pad an tri miz stokañ (Skeudenn 4). Goude bezañ bet adkempennet en dour, an holl NPoù o deus diskouezet un digresk bihan en EE hag o deus skarzhet war-dro ur c'hementad bihan (~5%) a insulin e-pad ar prantad stokañ tri miz (T 2).Koulskoude e kreskas ment rannigoù keitat an holl nanorannigoù. Kresket eo ment rannigoù an NPoù sec'het dre strinkañ hep manitol betek 525 nm, tra ma kreskas hini an NPoù sec'het dre strinkañ ha sec'het dre skorn gant mannitol betek 872 ha 921 nm, hervez an urzh (Taolenn 2).
Morfologiezh an NPoù insulin dic'hizet disheñvel miret e-pad tri miz : (a) Skeudenn SEM an NPoù insulin liofilizet gant mannitol ; (b) Skeudenn SEM eus nanopartikelloù insulin sec'het dre spluj hep mannitol ; (c) hep skeudennoù SEM mannitol eus NPoù insulin sec'het dre strinkenn.
Ouzhpenn-se e oa bet gwelet strinkennoù e nanopartikelloù insulin adkempennet sec'het dre strinkañ gant mannitol ha sec'het dre skorn (Skeudenn S2). Gallout a rafe bezañ kaoz eus rannigoù bras n'int ket bet staget mat en dour. An holl zisoc'hoù meneget a-us a ziskouez e c'hall an teknik sec'hañ dre strinkañ gwareziñ nanopartikelloù insulin diouzh an dizourañ ha kargoù uhel a nanorannigoù insulin a c'hell bezañ bet tapet hep leuniañ pe kriogwarez ebet.
Testeniekaet e voe dalc'h an insulin e-barzh ur metou pH = 2,5 gant pepsin, tripsin hag α-kimotripsin evit diskouez galloud gwareziñ an NPoù a-enep an digeriñ enzimek goude an dihidradur. Keñveriet e voe dalc'h insulin an NPoù dizouret gant hini an NPoù nevez-prientet, hag implijet e voe an insulin frank evel kontroll negativel. an tri tretadenn enzimek (Skeudenn 5a–c). Er c'hontrol, an testenioù diverkañ insulin eus an NPoù sec'het dre skorn gant mannitol hag an NPoù sec'het dre spurmant gant pe hep manitol a ziskouezas ur gwarez kalz uheloc'h eus an NP-se a-enep an digeriñ enzimek, ar pezh a oa heñvel ouzh hini an NPoù insulin nevez-prientet (skeudenn 1Pac-With, skoazell ar rannig pepsinoù). tripsin, hag α-kimotripsin, muioc'h eget 50%, 60% ha 75% eus an insulin a c'hellfe bezañ gwarezet e-barzh 4 eurvezh, hervez an urzh (Skeudenn 5a–c). Ar galloud-se da wareziñ an insulin a c'hellfe kreskiñ ar chañs da gaout muioc'h a insulin er red-gwad25. An disoc'hoù-se a ziskouez e c'hall sec'hañ dre strinkañ gant pe hep maninol ha skorn gant manniol mirout galloud an NPoù da wareziñ an insulin goude an dizourañ.
Emzalc'h gwareziñ ha dieubiñ an NPoù insulin dic'hizet : (a) gwareziñ an insulin e disoc'h pepsin ; (b) gwareziñ an insulin e-barzh an disoc'h tripsin ; (c) gwareziñ an insulin dre ziskoulm α-kimotripsin ; ( d) Emzalc'h skarzhañ an NPoù dizouret e pH = 2,5 disoc'h ; (e) emzalc'h dieubiñ an NPoù dizouret e pH = 6,6 disoc'h ; (f) emzalc'h dieubiñ an NPoù dic'hizet e disoc'h pH = 7,0.
An NPoù insulin sec'h nevez-prientet hag adkempennet a voe enkubet e-barzh tamponoù liesseurt (pH = 2,5, 6,6, 7,0) da 37 °C, o simulañ endro pH ar stomog, an duodenn hag ar bouzelloù bihan uhelañ, evit gwiriañ efed an insulin war ar resistañs d'an insulin. Emzalc'h skarzhañ en endroioù disheñvel. Tamm eus an hent gastrointestinal. Da pH = 2,5, an NPoù karget gant insulin hag an NPoù insulin sec'h diskoulmet a ziskouezas un diskarg kentañ e-kerzh an eurvezh kentañ, heuliet gant un diskarg gorrek e-kerzh ar 5 eurvezh da heul (Skeudenn 5d). Ar skarzhadenn buan-se e penn-kentañ a zo heñvel-tre ouzh disoc'h an diskar buan eus ar proteinennoù dilec'hiet penn-da-benn e framm diabarzh ar rannig. Da pH = 6,5 e tiskoueze an NPoù karget gant insulin hag an NPoù insulin sec'h adkempennet un diskar gorrek ha gorrek e-pad 6 eurvezh, rak heñvel e oa pH an disoc'h test ouzh hini an disoc'h prientet gant an NPoù (Skeudenn 5e). Da pH = 7 e oa an NPoù kazimant dic'houest da vezañ distaget penn-da-benn gant an daou gentañ eurvezhioù (Skeudenn 5f). Se zo kaoz e c'hoarvez diprotonadur ar c'hitozan pa vez ur pH uheloc'h, ar pezh a gas d'ur rouedad polimeroù nebeutoc'h stank ha da zilezel insulin karget.
Ouzhpenn-se, an NPoù insulin sec'het dre spurmant hep mannitol o deus diskouezet ur profil dieubiñ buanoc'h eget an NPoù dizouraet all (Skeudenn 5d–f). Evel deskrivet a-raok, an NPoù insulin adkempennet sec'het hep manitol o deus diskouezet ar ment rannigoù bihanañ. Ar rannigoù bihan a ginnig ur gorread brasoc'h, setu e vo an darn vrasañ eus ar medisin a-bouez war gorre ar medisin pe ar rannigoù buan, ar pezh a zegaso embann26.
Studiet e oa bet sitotoksisite an NPoù dre an analizenn MTT. Evel m'eo diskouezet e skeudenn S4, n'eus bet kavet efed pouezus ebet gant an holl NPoù dizouraet war ar vuhezegezh kelligel e kreskoù 50–500 μg/ml, ar pezh a laka da soñjal e c'haller implijout an holl NPoù dizouraet en un doare sur evit tizhout ar prenestr terapeutek.
An avu eo an organ pennañ dre an hini e vez kaset da benn gant an insulin e arc'hwelioù fiziologel. Ar c'helligoù HepG2 zo ul linenn gelligoù hepatoma denel a vez implijet alies evel ur patrom degemer hepatosited in vitro. Amañ e voe implijet ar c'helligoù HepG2 evit priziañ degemer kelligoù an NPoù dizouraet dre ar sec'hañ-skorn hag ar sec'hañ dre spurmant dre ar skanañ laser-fokesel dre skaniñ laser. sitometriezh ha gweled goude meur a eurvezh enkubadur gant insulin FITC frank en ur c'hementad a 25 μg/mL, NPoù karget gant insulinenn FITC nevez prientet ha NPoù karget gant insulinenn FITC dihidratet gant kementadoù insulin heñvel Graet e voe evezhiadennoù dre mikroskopiezh kementadel (CLSM). NPs liofilizet hep manol distrujet a oa bet priziet e-pad an dizourañ ha ne oant ket bet priziet an test-mañ. An nerzh fluoresañs etrekellig eus an NPoù karget gant insulin nevez prientet, an NPoù liofilizet gant mannitol, hag an NPoù sec'het dre spurmant gant ha hep manitol (Skeudenn 6a) a oa 4,3, 2,6, 2,4 ha 4,1 gwech uheloc'h eget ar strollad insulinoù dieub (Skeudenn 6). disoc'hoù a ziskouez eo kreñvoc'h an insulin enkapsulet evit an degemer kelligoù eget an insulin frank, dreist-holl abalamour da ment bihanoc'h an nanopartikelloù karget gant insulin produet er studiadenn.
Degemer ar c'helligoù HepG2 goude 4 eurvezh enkubadur gant NPoù nevez prientet ha NPoù dizouraet : (a) Dasparzh an adkempenn FITC-insulin gant kelligoù HepG2. (b) Keitat geometrikel an nerzh fluoresañs dielfennet dre sitometriezh ar red (n = 3), *P < 0,05 ruz keñveriet gant an insulin frank.
Evel-se ivez, ar skeudennoù CLSM a ziskouezas e oa kalz kreñvoc'h kreñvder fluoresañs FITC an NPoù karget gant FITC-insulin nevez prientet hag an NPoù sec'het gant FITC-insulin (hep mannitol) eget re ar skouerennoù all (Skeudenn 6a). d'an degemer kelligel, ar pezh a laka an insulin da zigreskiñ. An disoc'hoù-se a ziskouez e oa bet diskouezet gant an NPoù sec'het hep manitol an efedusted uhelañ evit an degemer kelligoù rak bihanoc'h e oa o ment rannigoù eget hini an NPoù sec'het dre skorn goude bezañ bet addizoloet.
Prenet e oa bet ar c'hitozan (pouez molekulel keitat 100 KDa, 75–85% diasetilet) digant Sigma-Aldrich. (Oakville, Ontario, Kanada). Prenet e oa bet an tripolifosfat sodiom (TPP) digant VWR (Radnor, Pennsylvania, SUA). Implijet e oa bet an insulinenn adkempennet er studiadenn-mañ gant Scientific Scientific, MA. SUA). An insulin denel merket gant fluorescein isothiocyanate (FITC) hag an 4′,6-diamidino-2-phenylindole dihydrochloride (DAPI) a oa bet prenet digant Sigma-Aldrich. (Oakville, Ontario, Kanada). Al linenn gelligoù HepG2 a oa bet tapet digant ATCC (Manassas, Virginiaall, SUA. A oa bet adkavet kronatoù analitek pe re all). derez.
Prientiñ un disoc'h CS 1 mg/ml en ur zizoloiñ anezhañ en dour distilhet div wech (dour DD) ennañ 0,1% a asid asetek. Prientiñ 1 mg/ml a ziskoulmoù TPP hag insulin en ur zizoloiñ anezho en dour DD hag en 0,1% a asid asetek, hervez an urzh. Prientet e oa bet ar rak-emulsion gant ur polizer PCU 1210 tizh uhel (Brinkmann Ind. Westbury, NY, USA).Ar c'houlzad prientiñ a zo evel-henn : da gentañ e vez ouzhpennet 2ml a zisoc'h TPP da 4ml a zisoc'h insulin, hag e vez mesket ar meskaj e-pad 30 munutenn ha mesket penn-da-benn. Goude-se e vez ouzhpennet an disoc'h mesket tamm-ha-tamm d'an dizoloadenn CS dre ur strinkell mesket dindan ur stirad uhel (100 rpm). miret e voe ar meskajoù dindan ur c'heflusker tizh uhel (15 000 rpm) en ur banell skorn e-pad 30 munutenn, ha kemmet e voent d'ur pH resis evit kaout NPoù insulin kroaziet. Evit homogenizañ ha digreskiñ ment ar rannigoù NPoù insulin e voent soniket e-pad 30 munutenn ouzhpenn en ur banell skorn gant ur sonikator a seurt sonikator (STUP, 2000 Hielscher Ultrasonics, Teltow, Alamagn).
An NPSoù insulin a oa bet amprouet evit an treuzkiz keitat Z, an indez liesdispersded (PDI) hag ar c'halloud zeta dre implijout muzulioù skignañ ar gouloù dinamek (DLS) dre implijout ur Litesizer 500 (Anton Paar, Graz, Aostria) dre o diluiñ en dour DD da 25°C. Ar morfologiezh hag an dasparzh ment a oa bet termenet dre un treuzkas mikroskop Hita 0707 (TEM) (Hitachi, Tokyo, Japan), ha goude-se e voe dielfennet ar skeudennoù gant ur meziant skeudenniñ Hitachi (Hitachi, Tokyo, Japan). Evit priziañ efedusted enkapsulañ (EE) ha barregezh kargañ (LC) an NPoù insulin, e voe pipetet an NPoù e-barzh tubennoù ultrasil gant ur pouez molekulel a 10-000 km ha Dada 500 xg e-pad 30 munutenn. An insulin hep kapsul er sil a oa bet muzuliet dre implijout ur reizhiad HPLC Agilent 1100 Series (Agilent, Santa Clara, Kalifornia, SUA) ennañ ur pomp pevarrenk, un emsampler, ur c'heflusker kolonenn hag un detekter DAD. An insulin a oa bet dielfennet gant ur c'holonenn C188 ZZbax, pe ur c'holonenn 35 μm. × 150 mm, Agilent, SUA) ha detektet da 214 nm. Ar fazenn heloc'h a oa asetonitril ha dour, ennañ 0,1% TFA, keñverioù gradient eus 10/90 da 100/0, ha redet e-pad 10 munutenn. Ar fazenn heloc'h a oa bet pompet gant ur feur red a 10 m/min. Lakaet e oa bet an temperadur da golonenn. 20 °C.Kalkulit ar c'hantvedoù EE ha LC dre implijout an daveennoù.(1) hag Eq.(2).
Testeniekaet e voe keñveriadurioù CS/insulin liesseurt etre 2,0 ha 4,0 evit gwellaat an NP insulin. Ouzhpennet e voe kementadoù disheñvel a zisoc'h CS e-pad ar prientiñ, tra ma veze miret ar meskaj insulin/TPP digemm. Prientet e voe NPoù insulin e-touez ar pH etre 4,0 ha 6,5 ​​dre reoliñ gant evezh pH ar meskaj goude bezañ ouzhpennet an holl zisoc'hoù (Tulin ha TPP CS).An EE hag ar ment rannigoù eus nanopartikelloù insulin a oa bet priziet e talvoudoù pH disheñvel ha keñverioù tolz CS/insulin evit gwellaat stummadur an NPoù insulin.
Lakaet e voe an NPoù insulin gwellaet war an endalc'her aluminiom ha goloet gant ur gwiad staget gant un tamm bandenn. Da c'houde e voe lakaet an endalc'herioù skrapet en ur sec'her skornet Labconco FreeZone (Labconco, Kansas City, MO, SUA) gant ur sec'her pladenn. Lakaet e voe an temperadur hag ar gwask vakuum da -100 °C, Torr. evit an 2 eurvezh kentañ, ha 0 °C ha 0,120 Torr evit an 22 eurvezh all eus ar 24 eurvezh evit kaout NPoù insulin sec'h.
Buchi Mini Spray Dryer B-290 (BÜCHI, Flawil, Suis) a oa bet implijet evit sevel insulin enkapsulet. Ar baramezioù sec'hañ dibabet a oa : gwrezverk 100 °C, red ar boued 3 L/min, ha red ar gaz 4 L/min.
An NPoù insulin a-raok hag a-c'houde an dizourañ a oa bet termenet dre ar spektroskopiezh FTIR-ATR. Nanopartikelloù dizourañ hag ivez an insulinenn frank hag ar c'hitozan a oa bet dielfennet dre implijout ur spektrofotometr FTIR Spectrum 100 (PerkinElmer, Waltham, Massachusetts, SUA) pourvezet gant ur skouerenn ATR hollvedel (Perkinling, Waltham, Waltham, Massachusetts, SUA). Keitat ar sinaloù a oa bet tapet diwar 16 skan gant ur resolution a 4 cm2 e-barzh ar frekañsoù etre 4000 ha 600 cm2.
Morfologiezh an NPoù insulin sec'h a oa bet priziet dre skeudennoù SEM eus an NPoù insulin sec'het dre skorn ha sec'het dre strinkañ tapet gant ur mikroskop elektronek skaniñ skinoù ionoù Helios NanoLab 650 (FIB-SEM) (FEI, Hillsboro, Oregon, SUA). Ar perzh pennañ implijet a oa ar voltadur 5 keV hag ar red 30 mA.
An holl NPoù insulin dic'hizet a voe adteuzet en dour dd. Ment ar rannigoù, PDI, EE ha LC a voe amprouet en-dro dre implijout ar memes doare meneget a-raok evit priziañ o c'halloud goude an dizourañ. Muzuliañ a reer ivez stabilded an NPoù anhidroinsulin dre amprouiñ perzhioù an NPoù goude bezañ bet stoket hir. Er studiadenn-mañ e voe miret an holl NPoù goude an dizourañ er yenerez evit an tri yenerez mizioù. Goude tri miz stokañ e voe amprouet an NPoù evit ment ar rannigoù morfologel, PDI, EE ha LC.
Dizoloiñ 5 mL a NPoù adkempennet e 45 mL ennañ liñvenn gastrik simulaet (pH 1,2, ennañ 1% pepsin), liñvenn intestinal (pH 6,8, ennañ 1% tripsin) pe disoc'h kimotripsin (100 g/mL, e tampon fosfat, pH 878) evit priziañ efedusted gwareziñ an insulinenn. NPs goude an dihidradur. Goret e voent da 37°C gant un tizh a 100 rpm. 500 μL eus an disoc'h a oa bet dastumet e poentoù amzer disheñvel ha termenet e oa bet ar c'hementad insulin dre HPLC.
Emzalc'h dieubiñ in vitro an NPoù insulin nevez prientet ha dizouraet a oa bet amprouet dre an doare sac'h dializ (troc'h pouez molekulel 100 kDa, Spectra Por Inc.). An NPoù sec'h nevez prientet hag adkempennet a oa bet dializet e liñvennoù da pH 2,5, pH 6,6, ha pH 7,0 (fofolinenn M. 100, saferet M, bufalin M. 1,000. PBS) evit simulañ endro pH ar stomog, an duodenn hag an divgroazell uhelañ, hervez an urzh. An holl skouerennoù a voe goret da 37 °C gant hejañ dibaouez da 200 rpm. Aspirañ al liñvenn er-maez eus ar sac'h dializ 5 mL d'an amzerioù da-heul : 0,5, 1, 2, 34, 6, ha leuniañ ar volum nevez diouzhtu dialysate.Saotradur an insulin er fluid a oa bet dielfennet dre HPLC, ha jedet e oa bet ar feur skarzhañ insulin eus an nanopartikloù diwar ar c'heñver insulin dieub skarzhet ouzh an insulin hollek enkapsulet er nanopartikelloù (Kevatal 3).
Ar c'helligoù HepG2 a oa bet kresket e pladennoù 60 mm treuzkiz dre implijout Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) ennañ 10% serum bovin fetal, 100 IU/mL penisilin, ha 100 μg/mL streptomycin 297°C. 95% a glebor keñverel, ha 5% a CO2. Evit an analizoù degemer e voe hadet ar c'helligoù HepG2 da 1 × 105 kellig/ml war ur reizhiad 8-poull Nunc Lab-Tek (Thermo Fisher, NY, SUA). Evit an testenioù sitotoksisite e voe hadet e pladennoù 6-poull (NY, NY, SUA) gant ur stankter a 5 × 104 kellig/ml.
Implijet e oa bet an analizenn MTT evit priziañ sitotoksisite an insulin NPs30 nevez-prientet ha dizouraet. Hadet e oa bet ar c'helligoù HepG2 e pladennoù 96 poull gant ur stankter a 5 × 104 kellig/mL ha sevenet e-pad 7 devezh a-raok an amprouiñ. Diluet e oa bet an NPoù insulin betek kementadoù disheñvel (50 da 50 μm/m/mL) ha sevenet e-barzh ur metou goude-se e voe roet d'ar c'helligoù. Goude 24 eurvezh enkubadur e voe gwalc'het ar c'helligoù 3 gwech gant PBS ha goret gant ur metou ennañ 0,5 mg/ml MTT e-pad 4 eurvezh ouzhpenn. Priziet e voe ar c'hitotoksisite dre vuzuliañ an digresk enzimek eus an tetrazoliom melen MTT da furmazanit en ur implijout 70 mg Tetrazoliom Lenner pladennoù spektrofotometr M200 pro (Tecan, Männedorf, Suis).
Efedusted degemer kelligoù an NPoù a oa bet amprouet dre mikroskopiezh skaniñ laser konfokal ha dre zielfennadur ar c'hitometriezh dre red. Pep poull eus ar reizhiad diazez kambr Nunc Lab-Tek a oa bet tretet gant FITC-insulin frank, NPoù karget gant FITC-insulin, hag adsavet 25 μg/mL NPs FITC-insulin dihidratet hag inkulet evit ar memes kresk evit ar memes kresk 4 eurvezh. Gwalc'het e voe ar c'helligoù 3 gwech gant PBS ha staget gant 4% paraformaldehid. Livet e voe an nukleoù gant 4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI). Gwelet e voe lec'hiadur an insulin dre implijout ur mikroskop laser/daou foton Olympus FV1000 (Konjus, Tokyo, Shikus Japan). Evit an dielfennadur sitometriezh dre red e voe ouzhpennet ar memes kementadoù a 10 μg/mL FITC-insulin frank, NPoù karget gant FITC-insulin, ha NPs FITC-insulin dizouraet dizoloet da bladennoù 96 poull hadet gant kelligoù HepG2 ha goret e-pad 4 eurvezh. Goude 4 eurvezh enkubet e voe tennet ar c'helligoù ha 3 gwech e voe enkubaet. gant FBS.5 × 104 kellig dre skouerenn a voe dielfennet gant ur sitometr red BD LSR II (BD, Franklin Lakes, New Jersey, Stadoù-Unanet).
An holl dalvoudoù a zo eztaolet evel keitat ± diforc'h skoueriek. Priziet eo bet ar c'heñveriadurioù etre an holl strolladoù dre implijout un ANOVA un tu pe t-test gant IBM SPSS Statistics 26 evit Mac (IBM, Endicott, New York, SUA) ha p < 0,05 a oa bet sellet outañ evel pouezus war an dachenn stadegel.
Diskouez a ra ar studiadenn-mañ soubidigezh ha barregezh ar sec'hañ dre strinkañ da zizourañ nanopartikloù kitozan/TPP/insulin kroaziet gant un adkempenn gwelloc'h eget an doareoù sec'hañ dre skorn skoueriek o implijout produioù stank pe krioprotektantoù, ur galloud kargañ uheloc'h. Ar nanopartikloù insulin gwellaet a roas ur ment rannigoù keitat ha 18 n efedusted an enkapsuladur a 99,4%. Disoc'hoù SEM ha FTIR goude an dic'hizañ a ziskouezas e oa bet miret ar framm sferek nemet e NPoù sec'het dre spurmant gant ha hep mannitol ha liofilizet gant manitol, met an NP liofilizet hep manitol a oa bet distrujet e-pad an dic'hizañ. a ziskouezas ar ment rannigoù keitat bihanañ hag ar garg uhelañ pa veze adkempennet. Emzalc'hioù dieubiñ an holl NPoù dizouraet-se a ziskouezas e oant bet distaget buan e disoc'hoù pH = 2,5 ha pH = 7, ha stabil-kenañ e disoc'hoù pH = 6,5. Keñveriet gant NPoù dizouraet addizoloet all, an NPoù dizoloet gant spurmantoù dizoloet hep an dud a ziskoueze an disoc'hoù buan-tre. a zo kempoell gant ar pezh a oa bet gwelet en analizenn adkempenn kelligel, rak an NPoù sec'het dre strinkañ hep mannitol o deus miret kazimant efedusted degemer kelligel an NPoù nevez prientet. An disoc'hoù-se a ziskouez eo ar nanopartikulennoù insulin sec'h prientet dre sec'hañ hep mannitol ar re wellañ evit o treuzfurmiñ pelloc'h e doareoù doareoù all, evel stummoù dourek pe doareoù all tabletennoù pe filmoù biopegañ.
Abalamour da gudennoù perc'henniezh intelektuel, n'eo ket hegerz d'an holl an ensavadurioù roadennoù bet krouet ha/pe dielfennet e-kerzh ar studiadenn-mañ, met hegerz int gant an aozerien war goulennoù reizh.
Kagan, A. Diabetez doare 2 : orinoù sokial ha skiantel, kemplezhded mezegiezh, hag efedoù evit ar c'hlañvidi hag ar re all. (McFarlane, 2009).
Singh, AP, Guo, Y., Singh, A., Xie, W. & Jiang, P. Diorren an enkapsuladur insulin : ha posupl eo bremañ reiñ dre gomz ?J. Pharmacy.bio-pharmacy.reservoir.1, 74–92 (2019).
Wong, CY, Al-Salami, H. & Dass, CR Araokadennoù diwezhañ e reizhiadoù degas liposomoù karget gant insulin dre gomz evit tretañ an diabetes.Displegañ.J. Pharmacy.549, 201–217 (2018).